M. Sánchez-‐Paniagua López&al.
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Estudiospreviosaportanevidenciasdequeaunqueel tratamientoposterior
conMCHnopermiteeliminar completamenteel ADNadsorbido inespecíficamente,
se logra una disminución considerable de las interacciones inespecíficas y una
eficiencia de hibridación superior a la de una SAMpura de ácido nucleico tiolado
(24). Con el objetivo de minimizar las absorciones inespecíficas de la sonda de
captura sobre la superficie electródica, en todos los casos se añadió mayor
cantidad de MCH que de sonda de captura. Valores de MCH inferiores a 0,5 mM
producían descensos drásticos en la señal voltamperométrica del 1-‐naftol,
generándose probablemente una monocapa irregular. Se comprobó que
concentraciones superioresa4,5mMprovocabanel desplazamientode lasondade
captura. Comoconsecuenciaseseleccionaroncomovalores límites0,5y4,5mM.
3.3. Ensayopreliminar
Antes de realizar los diseños de experimentos se llevó a cabo un estudio
previoconel finde comprobarque las sondasde capturae indicadorahibridan, de
forma selectiva, con el analito y que ese evento de hibridación se traduce en una
señal electroquímica. Se optó por valores de concentración de sonda de captura y
MCH utilizados con éxito en trabajos anteriores (16), 2 µM y 4,5 mM
respectivamente. El restode condiciones experimentales fueron las descritas en el
Procedimiento Experimental. En la Figura 3 se muestra el voltamperograma
obtenido con el analito y con una secuencia no complementaria (nC), ambas a un
nivel de concentración 1 nM. El analito dio una señal muy superior al blanco
mientrasque la señal generadapor la sondano complementaria fue semejantea la
generadapor el blanco, loquedemuestra la complementariedadde las sondas con
el analitoy laespecificidaddel dispositivo.
Figura3.-‐
Voltamperogramasobtenidos con la secuenciaanalito, una secuencianocomplementaria
yunblanco. Condiciones experimentales: Voltametríadiferencial de impulsos, amplituddepulso20
mV, velocidaddebarrido10mV/s.
E (V)
I (
µ
A)
0
1
2
3
4
5
6
7
0
0,2
0,4
0,6
blanco
nC1 nM
analito 1nM
