Deteccióndealérgenos de cacahuete…
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Figura 2.-‐ Etapa de hibridación.
(A) Hibridación homogénea o en disolución e (B) hibridación
heterogéneaoensuperficie
Concluida la etapa de hibridación, se procedió al marcaje enzimático,
añadiendo15µLdeunadisolucióndel conjugado fosfatasa alcalina-‐estreptavidina
(1,075
⋅
10
-‐3
g/L) sobre la monocapa. La sonda indicadora biotinilada se unió al
conjugado enzimático por el enlace de alta afinidad estreptavidina-‐biotina.
Finalmente, se llevó a cabo la detección electroquímica para lo cual se añadió, a la
superficie electródica, 40 µL de una disolución de 1-‐naftilfosfato 4 mM en
disolución tampón de medida. El enzima ALP cataliza la conversión de 1-‐
naftilfosfato a 1-‐naftol, producto electroactivo de estructura plana heterocíclica,
cuya oxidación se midió mediante voltamperometría de pulso diferencial (DPV),
realizandounbarridode0a+0,6V.
2.3.2.Diseñodeexperimentos
Se realizóundiseño factorial completo3
2
, con2variables (concentraciones
de sonda de captura yMCH)medidas a 3niveles. Los resultados se analizaron con
el software estadístico Statgraphics®Centurion, versión XVI (19). El modelo que
puedesoportarel diseñoutilizadoes la funciónpolinómicadesegundogrado:
2 1 12
2
2 22
2
1 11
2 2
1 1
0
XX X X X X Y
β+ β+ β+ β+ β+β=
donde los coeficientes
β
representan losefectos linealesycuadráticosde las
variables X
1
(concentración de sonda de captura, M) y X
2
(concentración deMCH,
M) así como su interacción. La variable dependiente o variable respuesta es la
respuestaelectroquímicamedidaporel genosensor (intensidaddecorriente, A).
