M. Sánchez-‐Paniagua López&al.
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potente herramienta en química analítica y, especialmente, en la optimización de
dispositivos analíticos, aunque su uso no está muy extendido en el campo de los
biosensores (11-‐13).
Lametodologíadediseñosdeexperimentosesunaherramientamatemática
yestadística cuyosobjetivos sonseleccionar laestrategiaexperimental óptimaque
permita obtener la máxima información con el mínimo coste y evaluar los
resultados experimentales obtenidos, garantizando lamáxima fiabilidad. Los DoE
ofrecenventajas incuestionables frente a lametodología clásica, entre las que cabe
destacar:
i
) estima el error experimental,
ii
) calcula la influencia simultánea de los
factores,
iii
) calcula el efecto de las interacciones,
iv
) con el mismo número de
experimentos proporcionamayor información, y v) supone un ahorrode tiempo y
esfuerzoasí comounmenor costeeconómico(14).
Existen gran variedad de diseños de experimentos (15). Una forma de
clasificarlos es en función del objetivo analítico propuesto, diferenciándose entre
diseños de cribado o “screening” y diseños de optimización
. En los diseños
screening
el objetivoes reducirel posiblenúmerode factoresexperimentalesqueafectana la
respuesta, descartando los que tienen menor o ninguna influencia en la misma.
Estos diseños son adecuados en la fase inicial de experimentación y entre losmás
utilizados se encuentran los Diseños Plackett-‐Burman y Diseños Factoriales a dos
niveles. Existen dos tipos de diseños factoriales, completos y fraccionados. En los
diseños factoriales completos seutilizan todas las combinacionesposiblesde todos
los factores a todos los niveles implicados en el experimento, habrá L
k
combinaciones de
L
niveles de
k
factores. Los diseños factoriales fraccionados
están formados por una fracción del correspondiente diseño factorial completo y
contemplan un número menor de experimentos. Una vez realizado el cribado de
las variables, se procede a la optimización de la respuesta, para lo cual se utilizan
diseños factoriales a tres o más niveles, Diseños Centrales compuestos, Diseños
Box-‐Behnken, Diseños Doehlert y Diseños D-‐óptimos entre otros, que aportan
información relacionada con el efecto cuantitativo de los factores así como sus
interacciones y permiten obtener la Superficie de Respuesta para la variable
dependienteenel espaciode lasvariables independientes.
2.MATERIALYMÉTODOS
2.1. Reactivos
El 6-‐mercapto-‐1-‐hexanol (MCH), ditiotreitol (DTT), fosfatasa alcalina-‐
estreptavidina (ALP-‐Strp), 1-‐naftilfosfato, albúmina humana (BSA), tween 20, las
sales para la preparación de las disoluciones tampón (Tris, KCl, MgCl
2
) y la
disolución20×de fosfatode sodiosalinoconEDTApH7.4 (200mMfosfatosódico,
M NaCl, 20mM EDTA) fueron suministrados por Sigma-‐Aldrich (España) y
