M. Sánchez-‐Paniagua López&al.
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La monocapa mixta (SAM), consta de una sonda de ADN tiolada y como
agentebloqueante,mercaptohexanol (MCH). La inmovilizaciónde la sonda se llevó
a cabomediante unprocesode quimisorción, unión colavente entre los grupos SH
de la sonda con el Au del electrodo. El MCH se intercala entre las hebras de ADN
quimisorbidas, controlando su disposición sobre el electrodo e impidiendo las
adsorciones inespecíficas de la sonda. Las cadenas de ADN se orientan paralelas
entre sí y perpendiculares a la superficie electródica (Figura 1), y así, favorecen el
procesodehibridación(17, 18).
Figura1.-‐
Formaciónde unamonocapa autoensambladamixta organizada sobre electrodos de oro
serigrafiado.
Para la inmovilización de la sonda de captura se depositaron 15 µL de una
disolución de la sonda en el tampón de inmovilización, manteniéndose en
atmósfera cerrada y saturada con agua durante 19 horas. La monocapa mixta se
completó adicionando 10 µL de MCH en disolución tampón de inmovilización;
dejándose 15min. Las concentraciones de sonda de captura yMCH cambian y se
especificanencadaunade lasexperiencias.
El genosensor propuesto sebasa enun formato tipo sándwichque requiere
la hibridación completa del analito con dos sondas diferentes. Una parte de la
secuencia del analito hibrida con una sonda indicadora biotinilada (hibridación
homogénea, Figura 2.A) y el resto de analito hibrida con la sonda de captura
inmovilizada (hibridación heterogénea, Figura 2.B). La hibridación homogénea se
llevóa cabomezclandoel analitoy la sonda indicadora en ladisolución tampónde
hibridación, conunaconcentracióndesonda indicadora final de2µM. Lamezclase
calentó a 98ºC para romper las estructuras secundarias de ambas sondas, se
sumergió en hielo y se dejó reposar a temperatura ambiente para favorecer la
hibridación. Posteriormente, se depositaron 15 µL de esta disolución sobre el
electrodo modificado, dejando que transcurriese la hibridación heterogénea
durante2horasa temperaturaambiente.
