Estudio de asociación epigenómica en la pérdida de peso…
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eron su consentimiento informado por escrito
; NCT01087086), el estudio fue aprobado por el
ad de Navarra (065/2009) y estuvo de acuerdo con
la Declaración de Helsinki (revisada en Corea del Sur en 2008).
Evaluaciones antropométricas y bioquímicas
Las medidas antropométricas (peso, talla, circunferencia de cintura y
cadera) se llevaron a cabo con los sujetos en ropa interior. El peso corporal se
midió con una precisión de 0,1 kg con una Tanita SC-‐330, (Tanita Corp, Japón). La
talla se estimó con un tallímetro (Seca 713 modelo, Postfach, Alemania) con una
precisión de 1 mm. El índice de masa corporal (IMC) se calculó como el peso
corporal dividido por la altura al cuadrado (kg/m
2
). Las circunferencias de la
cintura y la cadera se midieron siguiendo protocolos validados (28). La grasa
corporal total se midió por impedancia bioeléctrica Tanita SC-‐330 (TanitaCorp,
Japón) y por absorciometría con rayos X de doble energía (DXA) (Prodigy, versión
de software 6,0, Madison, WI) como se describió previamente(28).
Las concentraciones séricas de glucosa, colesterol total, lipoproteínas de
alta densidad-‐colesterol (HDL-‐c) y triglicéridos se midieron en un autoanalizador
Pentra C-‐200 (HORIBA ABX, Madrid, España) con los kits específicos. Las
concentraciones de insulina se determinaron mediante un kit de ensayo
inmunoenzimático (Mercodia, Uppsala, Suecia) en un autoanalizador Triturus
(Grifols SA, Barcelona, España).
Extracción de ADN
Muestras de sangre venosa se recogieron al inicio del estudio para la
obtención de ADN. El ADN genómico fue extraído utilizando el kit de purificación
de ADN
Master Purefor Blood Version II
(Biotecnologías Epicenter, Madison, WI,
EE.UU.) y se almacenó a -‐80°C hasta su procesamiento.
Determinación de patrones de metilación de ADN
El perfil epigenético del ADN genómico fue analizado en 48 individuos
seleccionados del estudio RESMENA-‐S utilizando el ensayo de metilación Human
Methylation 450 BeadChip (Illumina, San Diego, CA) conteniendo más de 485.000
sitios CpGs individuales. Brevemente, 500 ng de ADN genómico tratado con
bisulfito sódico (EZ DNA Methylation™ Kit; Epitect, Qiagen) fue amplificado,
marcado, hibridado con sondas metiladas y no metiladas y escaneado de los
microarrays en la plataforma HiScanSQ de Illumina, Inc. El análisis de imagen y
determinación de la señal de las sondas se realizó usando el software Genome
Studio, Módulo de metilación (Illumina, Inc).
Los datos de metilación en un sitio CpG concreto se obtuvieron a partir de
las intensidades de señal para la sonda metilada (M) y la no metilada (U) para ADN
genómico en esa posición. Así, los nivel de metilación (β) fueron calculados como la
