Propuestabiotecnológicaparael tratamientodel cáncer de cérvix uterino…
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-‐grupocontrol
-‐grupo tratadoconIL-‐2
-‐grupo tratadocon liposomas transportadoresde IL-‐2
El tratamiento se aplicó diariamente, durante 5 días, después de los cuales
se sacrificó a los animales y se realizó una inspecciónminuciosa. Se cuantificaron
los tumores, seextrajeronysecalculó lamasa tumoral total.
2.3.4. Evaluación del efecto protector de los liposomas con IL-‐2 frente a los
posiblesefectosadversoscausadospor IL-‐2 libre(notransportada)
Se emplean losmismos grupos de ratones del estudio anterior. Después de
sacrificarles, se realiza una inspecciónminuciosa para evaluar los posibles efectos
adversos visibles derivados del tumor (grupo control), del tratamiento con IL-‐2
libreydel tratamientoconIL-‐2transportadoen liposomas.
2.3.5. Evaluación del efecto de los liposomas con IL-‐2 sobre las células
tumorales.
Para la observación de los posibles cambiosmorfológicos de las células de
los tumores inducidos en los ratones, debido al tratamiento con liposomas con IL-‐
2, se sacrificaron, lotesde ratonesdespuésdeunaydoshorasde laadministración
de los liposomas con IL-‐2. Los tumores extraídosde los ratones sacrificados fueron
fijados con glutaraldehído al 2.5% durante 1 hora y postfijados con solución
Osmio-‐Milloning al 1% durante 1 hora. Las muestras fueron deshidratadas y
embebidas enEpon®paraproceder a cortar secciones finas de los tumores que se
colocanen rejillas de cobre recubiertas conFormvar y se contrastanconcitratode
plomo para su evaluación por microscopía electrónica de transmisión
(microscopioelectrónico JEOL-‐JEM-‐1010, JEOLUSA, Inc.,MA, USA).
2.4 Estudios de estabilidad física de los liposomas en el marco de la
preformulacióndelmedicamentobiotecnológico.
Para la evaluación de la estabilidad física de los liposomas, se procedió a
realizar lamedición inicial de su tamaño y su complejidad en el citómetro de flujo
(16), para después analizar sus posibles cambios físicos debidos a la exposición a
diferentes causasde inestabilidadduranteundeterminadoperiodode tiempo.
Los cambios en el tamaño y la complejidad de los liposomas se
determinaron mediante la evaluación de las diferencias entre los histogramas
obtenidos en la citometría para el tamaño y la conformación de los liposomas
recién preparados y tras el almacenamiento. Se utilizó la estadística de
Kolmogorov-‐Smirnove (K-‐S), de forma que, un valor de D (Diferencia) de 0
indicaríaun total solapamientoypor tantouna total igualdadde loshistogramas, y
un valor de 1 indicaría que ningún punto está en concordancia, por lo que los
histogramas serían totalmente diferentes. Para establecer la existencia de una
