RosalvaRangel-‐Corona&al.
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una relaciónmolar 1:1. Lamezcla de lípidos (10µmol) fue disuelta en cloroformo,
el disolvente fueevaporadoutilizandoun flujodenitrógenoapresiónreducida, los
liposomas se formaron por la hidratación de la película de lípidos en solución
amortiguadora de fosfatos (PBS) (liposomas vacíos) o con IL-‐2 (R&D Systems,
USA) (100UI/mL) enPBS (liposomas con IL-‐2)mediante tres ciclos de sonicación
(sonicador Lab Supply G112SOI) de 5 segundos separados por períodos de
descanso de 30 segundos. Los liposomas formados fueron lavados por
sedimentación a 200.000g durante 40 minutos en PBS, y después fueron
resuspendidosenPBS.
2.2Aspectode los liposomasconIL-‐2:Microscopíaelectrónica
Para determinar lamorfología y tamaño de nuestro sistema transportador
se recurrió a la microscopía electrónica. Los liposomas con IL-‐2 se colocaron en
rejillas de cobre con 200mallas que estaban cubiertas con Formvar, se incubaron
durante 20minutos a temperatura ambiente y después se eliminó el líquido por
decantación con papel filtro. Posteriormente, las muestras se tiñeron con una
solución acuosa de acetato de uranilo al 4% durante 5 minutos, se eliminó el
excesode líquidoysedejaronsecardurante24horas.
2.3. Evaluacióninvivo, enanimalesdeexperimentación
2.3.1. Animalesdeexperimentación
Se utilizaron ratones hembra de la cepa CBA/ca de 18 a 24meses de edad.
Semantuvieron en cajas especiales con ambiente controlado (esterilidad y 21ºC),
en grupos de cuatro, y se les suministró alimento y agua ad libitum, según los
protocolos aprobados por la Comisión de Ética para animales de experimentación
de la UNAM (Universidad Nacional Autónoma de México), la cual cumple con los
códigosparael cuidadoyusodeanimalesdeexperimentación.
2.3.2. Inducciónde tumoresenratones
Paraelmodelode inducciónde tumoresyevaluacióndel efectobiológicode
los liposomas con IL-‐2obtenidos seutilizó la técnicadesarrolladaporRangel et al.
(14). Brevemente, se utilizaron ratones singénicos de la cepa CBA, se
inmunodeprimieron utilizando hidrocortisona, se les inyectaron las células
tumorales de la línea INBL, se continuó la inmunodepresión enun tiempo total de
seis semanas. Asumiendoquecada tumores similaraunaesfera, secalculó lamasa
tumoral de cada uno con la fórmula 4/3 πr
3
y se sumó la masa tumoral total.
Además seevaluaron losefectosadversosvisiblesgeneradospor lamasa tumoral.
2.3.3. Evaluación del efecto de los liposomas con IL-‐2 sobre el tamaño de la
masatumoral.
Una vez inducidos los tumores en los ratones y determinado su tamaño
inicial, seestablecieron3grupos:
