Sesión científica Premios Nobel 2014
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Debido a su pequeño número, casi todos ellos estaban situados a una distancia
mayor que el límite de difracción de Abbe de 0,2 micrómetros. Por lo tanto la
posición de cada proteína brillante podría ser registrado de forma muy precisa en
el microscopio. Después de un tiempo, cuando su fluorescencia se apagaba, los
científicos activaban un nuevo subgrupo de proteínas. Una vez más, el pulso era
tan débil de modo que sólo una fracción de las proteínas brillaba, después de lo
cual otra imagen se tomaba. Este procedimiento se repetía una y otra vez (Figura
5).
Figura 5
.- Descripción de la técnica inventada por Betzig basada en los descubrimientos de W. E.
Moerner. Con esta técnica se hacen fotografías consecutivas de la misma preparación iluminándola
varias veces, de modo que en cada foto se iluminan moléculas distintas. Cuando se superponen las
fotos las distancias entre dichas moléculas es inferior al límite de Abbe.
Cuando Betzig superpuso las imágenes obtuvo una imagen de alta
resolución de la membrana de los lisosomas. A esta técnica se la denominó PALM
(photoactivated localization microscopy) que podría traducirse como microscopía
de localización fotoactivada o microscopía de una sola molécula.
Su resolución era mucho mejor que el límite de difracción de Abbe (Figura
6).
Figura 6.-
Comparativa entre una imagen confocal y una imagen por la técnica PALM (microscopía
de molécula única) de las proteínas de la membrana lisosomal. Obsérvese la extraordinaria
resolución de la imagen de la derecha, donde claramente se aprecia que el limite de Abbe ha sido
superado.
