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Paloma Santos-Moriano et al
Figura 11. Visualización de las esferas de alginato y los DALGEEs. A. Esfera de alginato visualizada con SEM FEI INSPECT en
condiciones de bajo vacío. Escala: 1 mm. B y C. DALGEEs de LEV visualizados con SEM FEI QUANTA 200 en condiciones de bajo
vacío (30.0 Pa). Escala B: 1.0 mm. Escala C: 50.0 µm. D. Superficie de DALGEE de LEV entrecruzado con TG visualizado con SEM
FEI QUANTA 200 en condiciones de bajo vacío (30.0 Pa). Escala: 10.0 µm. E. Fotografía de esferas de alginato (izq.) y DALGEEs
(dcha.).
cambio de selectividad en la producción de trisacáridos
4. DISCUSIÓN cuando la enzima se inmoviliza.
En cuanto a la producción de azúcares más largos con
Los datos obtenidos en la caracterización de la el uso de la columna CarboPack PA200 se pudo visualizar
levansacarasa de Z. mobilis parecen concordar con el crecimiento de los FOS hasta un grado de
estudios previos sobre esta enzima (16, 20, 29, 30). polimerización de aproximadamente GF20. Muestras de
En cuanto a las tres bandas con actividad reductora de tiempos más largos no mostraban tantos picos de alto
azúcares presentes en el gel de actividad se enviaron a un grado de polimerización. Esto puede ser debido a que todo
laboratorio externo para secuenciar su extremo N-terminal se ha transformado ya en levano de más peso molecular
y comprobar qué clase de enzimas son probablemente las que no es posible visualizar por cromatografía.
dos más importantes correspondan a las dos levansacarasas Cuando la enzima se inmovilizó por atrapamiento en
de Z. mobilis descritas en su genoma (números de acceso alginato cálcico se observaba lixiviación incluso cuando
en GeneBank AAV88999.2 y AAV88998.1 (31). LEV había sido entrecruzada con TG. Sin embargo con la
En cuanto a la producción de FOS se encontró cierta estrategia de los DALGEEs previo entrecruzamiento con
discordancia entre los resultados publicados previamente y TG se conservaba un 85% de la actividad tras 15 ciclos de
nuestros resultados. Además nunca antes se había hecho reacción. Siempre se obtenía el mismo perfil de actividad
un estudio cromatográfico en detalle. Mientras que en la en el que el segundo ciclo de reacción daba más actividad
bibliografía la 6-kestosa está definida como el principal que el primero. Una posible explicación a este fenómeno
producto de LEV (20) encontramos que esto era verdad es que cuando las esferas se secan y se quedan compactas
solo durante las primeras horas de reacción usando la algunas moléculas de enzimas no son accesibles para el
enzima soluble. Por el contrario con la enzima sustrato. Cuando los DALGEEs se incuban en una
inmovilizada el principal producto era la 1-kestosa. disolución de sacarosa en el primer ciclo se rehidratan
También hubo diferencias en las cantidades de FOS ligeramente haciendo la red de inmovilización más flexible
producidas por la enzima soluble e inmovilizada. La y facilitado la difusión de sustratos y productos. Es
enzima soluble sintetizaba considerablemente más 6- interesante comprobar que los DALGEEs no vuelven a su
kestosa y neokestosa que la enzima inmovilizada. También forma original de esferas de alginato totalmente hidratadas
se producía ligeramente más 1-kestosa con la enzima debido a la baja actividad del agua (aw) de la disolución de
soluble pero no de manera significativa. Por otra parte la sacarosa empleada.
nistosa presentaba prácticamente la misma tasa de
producción en todas las reacciones. Esto significa un
60 @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain
Figura 11. Visualización de las esferas de alginato y los DALGEEs. A. Esfera de alginato visualizada con SEM FEI INSPECT en
condiciones de bajo vacío. Escala: 1 mm. B y C. DALGEEs de LEV visualizados con SEM FEI QUANTA 200 en condiciones de bajo
vacío (30.0 Pa). Escala B: 1.0 mm. Escala C: 50.0 µm. D. Superficie de DALGEE de LEV entrecruzado con TG visualizado con SEM
FEI QUANTA 200 en condiciones de bajo vacío (30.0 Pa). Escala: 10.0 µm. E. Fotografía de esferas de alginato (izq.) y DALGEEs
(dcha.).
cambio de selectividad en la producción de trisacáridos
4. DISCUSIÓN cuando la enzima se inmoviliza.
En cuanto a la producción de azúcares más largos con
Los datos obtenidos en la caracterización de la el uso de la columna CarboPack PA200 se pudo visualizar
levansacarasa de Z. mobilis parecen concordar con el crecimiento de los FOS hasta un grado de
estudios previos sobre esta enzima (16, 20, 29, 30). polimerización de aproximadamente GF20. Muestras de
En cuanto a las tres bandas con actividad reductora de tiempos más largos no mostraban tantos picos de alto
azúcares presentes en el gel de actividad se enviaron a un grado de polimerización. Esto puede ser debido a que todo
laboratorio externo para secuenciar su extremo N-terminal se ha transformado ya en levano de más peso molecular
y comprobar qué clase de enzimas son probablemente las que no es posible visualizar por cromatografía.
dos más importantes correspondan a las dos levansacarasas Cuando la enzima se inmovilizó por atrapamiento en
de Z. mobilis descritas en su genoma (números de acceso alginato cálcico se observaba lixiviación incluso cuando
en GeneBank AAV88999.2 y AAV88998.1 (31). LEV había sido entrecruzada con TG. Sin embargo con la
En cuanto a la producción de FOS se encontró cierta estrategia de los DALGEEs previo entrecruzamiento con
discordancia entre los resultados publicados previamente y TG se conservaba un 85% de la actividad tras 15 ciclos de
nuestros resultados. Además nunca antes se había hecho reacción. Siempre se obtenía el mismo perfil de actividad
un estudio cromatográfico en detalle. Mientras que en la en el que el segundo ciclo de reacción daba más actividad
bibliografía la 6-kestosa está definida como el principal que el primero. Una posible explicación a este fenómeno
producto de LEV (20) encontramos que esto era verdad es que cuando las esferas se secan y se quedan compactas
solo durante las primeras horas de reacción usando la algunas moléculas de enzimas no son accesibles para el
enzima soluble. Por el contrario con la enzima sustrato. Cuando los DALGEEs se incuban en una
inmovilizada el principal producto era la 1-kestosa. disolución de sacarosa en el primer ciclo se rehidratan
También hubo diferencias en las cantidades de FOS ligeramente haciendo la red de inmovilización más flexible
producidas por la enzima soluble e inmovilizada. La y facilitado la difusión de sustratos y productos. Es
enzima soluble sintetizaba considerablemente más 6- interesante comprobar que los DALGEEs no vuelven a su
kestosa y neokestosa que la enzima inmovilizada. También forma original de esferas de alginato totalmente hidratadas
se producía ligeramente más 1-kestosa con la enzima debido a la baja actividad del agua (aw) de la disolución de
soluble pero no de manera significativa. Por otra parte la sacarosa empleada.
nistosa presentaba prácticamente la misma tasa de
producción en todas las reacciones. Esto significa un
60 @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain
